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                ELISA實驗加樣時產生氣泡的原因及注意的細節

                更新時間:2023-12-11      瀏覽次數:241

                ELISA實驗加樣時通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍,導致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內反應不均一。很多說明書、教科書上也都提到,加樣時要避免出現氣泡,這到底是什么原因呢?因為在做實驗的過程中,有時為了打干凈槍頭里面的液體,很容易產生氣泡,是不是這樣對實驗結果會后什么影響?

                原因:

                1.通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍,導致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內反應不均一。

                2.包被時有氣泡的話,將導致包被不完-全實際包被里下降―–弱陽性甚至假陰性。

                3.封閉時有氣泡的話,將導致大里未結合位點的存在,引起非特異性結合-–本底增高,假陽性。

                4.加樣時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結合––弱陽性甚至假陰性。

                5.加二抗時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結合––弱陽性甚至假陰性(競爭法相反-—–一假陽性>。

                6.加顯色液時有氣泡的話-—–顯色不完-全。

                7.加終止液時有氣泡的話(1、不能完-全終止反應2、影響酶標儀比色,OD值增高)

                8.洗滌時有氣泡的話,非特異性結合物不能完-全洗去,做無用功。

                注意事項:

                精準的儀器和準確的操作是保證ELISA結果準確關鍵,怎樣的加樣方式才是正確呢?ELISA實驗中一般有5次加樣,即加標本、加檢測抗體、加酶結合物和加顯色底物及終止液。

                1.實驗室使用的微量加樣器應注意保養并定期校正。ELISA比較敏感,每孔加入液體量誤差會導致結果讀數差別,因此避免儀器帶來誤差。

                2.加樣前,溶液充分混勻,垂直懸空加入液體,避免加在孔壁上,不可產生氣泡。

                3.加樣時避免液體濺出,如有樣本濺出,應用吸水紙輕輕拭干,并做相應記錄。

                4.如果加樣槍漏氣以至于加樣的量不夠,不能用槍吸出再加,做相應記錄實驗。

                5.每次加樣順序一致,尤其底物、終止液順序一致,保證每個孔顯色時間相同。



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